邻苯二甲酸二丁酯（DBP）ELISA检测试剂盒介绍，用于精确检测检测饮用水、饮料、酒等样本中的邻苯二甲酸二丁酯（DBP）。
| 产品编号 |
0303010001 |
| 产品名称(中文) |
邻苯二甲酸二丁酯（DBP）ELISA检测试剂盒 |
| 产品名称(英文) |
DBP塑化剂试剂盒 |
| 用途 |
用于精确检测检测饮用水、饮料、酒等样本中的邻苯二甲酸二丁酯（DBP） |
| 贮存方式 |
保存试剂盒于2～8℃
|
立即订购
一、概要
邻苯二甲酸二丁酯（Dibutyl phthalate，DBP）是一种常用的增塑剂，也用作胶粘剂和印刷油墨的添加剂，也可用作一种杀体外寄生虫药。它具有较强的生殖毒性，可引起男性生育能力下降，尤其对儿童的毒性更大。DBP主要存在于人造革、塑料制品、化妆品、香精及农药中。DBP的检测方法有高效液相色谱法(HPLC)，气相色谱法(GC)等。而使用DBP ELISA试剂盒则能够快速而准确的分析样品中DBP残留。
本试剂盒是应用ELISA技术研发的新一代DBP检测产品，操作时间短于60min，能最大限度地减少操作误差和工作强度。
二、试验原理
本试剂盒采用间接竞争ELISA方法，在酶标板微孔条上预包被邻苯二甲酸二丁酯（DBP）抗原，样本中邻苯二甲酸二丁酯（DBP）和此抗原竞争抗邻苯二甲酸二丁酯（DBP）抗体（抗试剂），同时抗邻苯二甲酸二丁酯（DBP）抗体与酶标二抗（酶标物）相结合，经TMB底物显色，样本吸光值与其含有的邻苯二甲酸二丁酯（DBP）成负相关，与标准曲线比较再乘以其对应的稀释倍数，即可得出样品中邻苯二甲酸二丁酯（DBP）的含量。
三、适用范围
可定性、定量检测饮用水、饮料、酒、塑料包装等样本中的邻苯二甲酸二丁酯（DBP）。
四、使用单位需自备的设备及试剂
设备：
┅┅微孔板酶标仪450nm/630nm
┅┅振荡器
┅┅恒温培养箱
┅┅涡旋仪
┅┅天平：感量0.01g
┅┅超声波清洗器（塑料包装中DBP检测）
┅┅旋转蒸发仪（塑料包装中DBP检测）
┅┅微量移液器：单道 20μL～200μL、200μL～1000μL、
多道 250μL
┅┅聚苯乙烯离心管：1.5mL
┅┅带塞玻璃试管：10mL
┅┅玻璃滴管
┅┅量筒
┅┅具塞锥形瓶（50mL，塑料包装中DBP检测）
试剂：
----去离子水
----色谱纯正己烷
----色谱纯甲醇
五、提供的材料与试剂
|
组份名称 |
96T装量 |
48T装量 |
备注 |
|
酶标板 |
96T |
48T |
其它各规格装量按比例增加或减少，具体装量以实物为准。 |
|
标品×6瓶* |
1mL |
0.5mL |
|
DBP酶标物 |
6mL |
3mL |
|
DBP抗试剂 |
6mL |
3mL |
|
显色液 |
12mL |
6mL |
|
终止液 |
6mL |
3mL |
|
浓缩洗涤液（10×） |
40mL |
20mL |
*注：标准品浓度分别为0ppm、0.03ppm、0.09ppm、0.27ppm、0.81ppm、和2.43ppm。
编号分别为①②③④⑤⑥
六、溶液的配制
配液1: 洗涤工作液
用去离子水将浓缩洗涤液（10×）按1 : 9体积比进行稀释，即1份浓缩洗涤液（10×）加9份去离子水。用于酶标板的洗涤，洗涤工作液在4℃环境可保存一个月。
配液2: 样品稀释液
用去离子水将色谱纯甲醇按35 : 65体积比进行稀释，即35份色谱纯甲醇加65份去离子水，储存于干净的密封玻璃容器中。用于样品的稀释。
配液3：样品萃取液（塑料包装测定专用）
色谱纯甲醇与色谱纯正己烷以3:1的体积比混合均匀，即75份色谱纯甲醇加25份色谱纯正己烷，储存于干净的密封玻璃容器中。
七、样本前处理步骤
（一）瓶装或桶装饮用水（包括纯净水、矿泉水等）
┅┅恢复至室温后取260μL样品，加入色谱纯甲醇140μL，混匀后检测。
稀释倍数：1.54
注意：如果样本中的邻苯二甲酸二丁酯（DBP）含量较高，那么必须对样品继续进行稀释，注意必须使用样品稀释液进行稀
释。
（二）瓶装或罐装饮料、白酒（包括茶饮料、碳酸饮料、果汁饮料等）
┅┅在干净的玻璃试管中加入5mL样品，加入2mL色谱纯的正己烷，盖上盖后振荡3min，然后静置，待分层后取上层清液1mL，于干净的玻璃器皿中挥干。挥干后用1mL 35%的甲醇重溶，转移至1.5ml离心管后待测。
稀释倍数：0.4
注意：如果样本中的邻苯二甲酸二丁酯（DBP）含量较高，那么必须对样品继续进行稀释，注意必须使用样品稀释液进行稀释。
（三）塑料包装材料
┅┅取塑料包装材料中的洁净部分（不能有粘胶，彩色图案等）（>2.0g）粉碎或剪碎（0.25cm*0.25cm以下），混合均匀备用。
准确称量塑料碎片0.20g，置于50ml具塞三角瓶中，加入萃取液30ml，置于超声波清洗器中，25℃超声20分钟，收集萃取液。重复该萃取步骤一次。将合并的萃取液用旋转蒸发仪减压蒸干。将蒸干样品用35%甲醇复溶（1ml）后ELISA检测。
稀释倍数：5
注意：如果样本中的邻苯二甲酸二丁酯（DBP）含量较高，那么必须对样品继续进行稀释，注意必须使用样品稀释液进行稀释。
八、检测步骤
测定前应须知：
1、使用之前将所有试剂和需用板条的温度回升至室温（20～25℃）。
2、使用之后立即将所有试剂放回2～8℃。
3、在ELISA分析中的再现性，很大程度上取决于洗板的一致性，正确的洗板操作是ELISA测定程序中的要点。
4、在所有恒温孵育过程中，避免光线照射，用盖板膜封住微孔板。
5、实验中的试剂有一定的危害性，整个过程应戴手套操作。
操作步骤：
1、将所需试剂从冷藏环境中取出，置于室温（20～25℃）平衡30min以上，注意每种液体试剂使用前均须摇匀。
2、取出需要数量的微孔板，将不用的微孔板放进原锡箔袋中并且与提供的干燥剂一起重新密封，保存于2～8℃。不要冷冻。
3、洗涤工作液在使用前也需回温。
4、编号：将样本和标准品对应微孔按序编号，每个样本和标
准品做2孔平行，并记录标准孔和样本孔所在的位置。
5、加标准品/样本：加标准品/样本50μL到对应的微孔中，加入DBP抗试剂50ml/孔，再加入DBP酶标物50μL/孔，轻轻振荡混匀，用盖板膜盖板后37℃恒温培养箱中反应40min。
6、洗板：小心揭开盖板膜，将孔内液体甩干，用洗涤工作液300μL/孔，充分洗涤5次，每次间隔30s，用吸水纸拍干（拍干后未被清除的气泡可用未使用过的枪头戳破）。
7、显色：加入显色液100μL/孔，用盖板膜盖板后置37℃恒温培养箱反应10min。
8、测定：加入终止液50μL/孔，轻轻振荡混匀，设定酶标仪于450nm处（建议用双波长450/630nm检测，请在5min内读完数据），测定每孔OD值。(若无酶标仪，则不加终止液用目测法可进行判定)。
九、结果判定
结果判定有两种方法，粗略判定可用第1种方法，而定量判定用第2种方法。注意样本吸光值与其所含邻苯二甲酸二丁酯（DBP）成负相关。
1、用样本的平均吸光度值与标准值比较即可得出其浓度范围(ppm)。假设样本1的吸光度值为0.678，样本2的吸光度值为1.722，标准液吸光度值分别是：0ppm为2.150；0.03ppm为1.867；0.09ppm为1.509；0.27ppm为0.863；0.81ppm为0.399；2.43ppm为0.141。则样本1的浓度范围是0.09ppm～0.81ppm；样本2的浓度范围是0.03ppm～0.09ppm 再乘以其对应的稀释倍数即可得出样本中邻苯二甲酸二丁酯（DBP）的浓度范围。
2、定量分析
（1）百分吸光率的计算，标准品或样本的百分吸光率等于标准品或样本的百分吸光度值的平均值（双孔）除以第一个标准（0标准）的吸光度值，再乘以100%，即
B—标准溶液或样本溶液的平均吸光度值
B0—0(ppm)标准溶液的平均吸光度值
（2）标准曲线的绘制与计算
以标准品百分吸光率为纵坐标，以邻苯二甲酸二丁酯（DBP）标准品浓度（ppm）的半对数为横坐标，绘制标准曲线图。将样本的百分吸光率代入标准曲线中，从标准曲线上读出样本所对应的浓度，乘以其对应的稀释倍数即为样本中邻苯二甲酸二丁酯（DBP）实际量。
若利用试剂盒专业分析软件进行计算，更便于大量样本的准确、快速分析。（欢迎来电索取）
十、注意事项
1、试剂及样本没有回到室温（20～25℃）会导致所有标准的OD值偏低。
2、在洗板过程中如果出现板孔干燥的情况，则会出现标准曲线不成线性，重复性不好的现象。所以洗板拍干后应立即进行下一步操作。
3、每加一种试剂前需将其摇匀。
4、反应终止液为2M硫酸，避免接触皮肤。
5、不要使用过了有效日期的试剂盒；也不要使用过了有效期的试剂盒中的任何试剂，掺杂使用过了有效期的试剂盒会引起灵敏度的降低；不要交换使用不同批号试剂盒中的试剂。
6、储存条件
保存试剂盒于2～8℃，不要冷冻，将不用的酶标板微孔板放进自封袋重新密封。标准物质和无色的发色剂对光敏感，因此要避免直接暴露在光线下。
7、试剂变质的迹象
发色试剂有任何颜色表明发色剂变质，应当弃之。0标准的吸光度（450/630nm）值小于0.5（A450nm<0.5）时，表示试剂可能变质。
8、在加入显色液后，一般显色时间为10min即可。若颜色较浅，可延长反应时间到15min（或更长）。反之，则减短反应时间。
9、浓缩洗涤液如有结晶属正常现象，请加热溶解后使用。
10、该试剂盒最佳反应温度为37℃，温度过高或过低将导致检测吸光度值和灵敏度发生变化。
11、本试剂盒应用于筛查实际样品，检测若为阳性样品，应该
用另一种方法如HPLC或LC/MS加以确证。
12、特别注意：由于DBP存在于很多塑料、滤纸、乳胶管等材料中，所以实验过程中尽量采用玻璃器具，尤其注意试验用水一定要存放在玻璃容器中。
productInfo.asp?11337.html
